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技術(shù)服務(wù) 哺乳動物細胞雙雜交服務(wù)

更新時間:2020-04-28點擊次數(shù):1190

艾柏森(北京)生物科技有限公司

酵母雙雜交檢測實驗技術(shù)服務(wù)

  隨著分子生物學(xué)研究尤其是人類基因組計劃的迅速發(fā)展,為適應(yīng)對眾多基因或蛋白進行功能研究的發(fā)展趨勢,已出現(xiàn)了很多新技術(shù)。其中酵母雙雜交技術(shù)以其簡便,靈敏,高效以及能反映不同蛋白質(zhì)之間在活細胞內(nèi)的相互作用等特點在基因功能的研究中得到了廣泛的應(yīng)用。

  蛋白的酵母雙雜交實驗是以酵母的遺傳分析為基礎(chǔ),研究反式作用因子之間的相互作用對真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控影響的實驗,同以往研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)之間相互作用的實驗手段相比,酵母雙雜交系統(tǒng)具有其*優(yōu)勢。

1、融合體蛋白之間的相互作用是在真核酵母細胞內(nèi)進行,蛋白質(zhì)保持天然的折疊狀態(tài),這是其他離體生化檢驗方法所缺乏的,它所證實的蛋白質(zhì)間相互作用將更接近于體內(nèi)的真實水平。
2、雙雜交系統(tǒng)的敏感度非常高,蛋白質(zhì)之間結(jié)合常數(shù)低至1mmol/L時都可以被偵測。
3、在篩選cDNA 文庫時,雙雜交系統(tǒng)能夠簡捷地得到編碼相互作用蛋白的基因序列,它只需構(gòu)建質(zhì)粒而不必準備抗體或純化蛋白,省略了其它體外檢測蛋白之間相互作用方法所必須的蛋白抽提、純化等繁瑣步驟。

 

酵母雙雜交實驗原理:

  以Gal4系統(tǒng)為例,BD和AD分別由Gal4蛋白上不同的兩個結(jié)構(gòu)域(1-147aa與768-881aa)構(gòu)成。在利用GAL4系統(tǒng)篩選cDNA文庫或研究蛋白間的相互作用時,DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域與靶蛋白即"誘餌"相結(jié)合,轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域與文庫蛋白或要驗證的蛋白相結(jié)合。一般情況下,單獨的BD可以與GAL4上游活化序列(GAL UAS)結(jié)合但不能引起轉(zhuǎn)錄,單獨的AD則不能與GAL UAS結(jié)合;只有當(dāng)BD與AD分別表達的融合蛋白由于相互作用而導(dǎo)致兩者在空間上相互靠近時,BD與AD才能與GAL UAS結(jié)合并且引起報道基因的轉(zhuǎn)錄,從而激活下游報告基因,通過這一系列實驗來驗證兩個蛋白之間的相互作用。

 

★ 酵母單/雙雜交檢測服務(wù)項目列表

 

服務(wù)項目

說明

周期

服務(wù)報價

酵母單雜交文庫構(gòu)建技術(shù)服務(wù)

基于重組方法的文庫構(gòu)建方案(請參考本頁詳細說明)

4-6周

請聯(lián)系

客服

酵母單雜交文庫篩選技術(shù)服務(wù)

DNA—蛋白質(zhì)相互作用(請參考本頁詳細說明)

12-15周

核蛋白體系酵母雙雜交文庫篩選技術(shù)服務(wù)

基于pDEST22或pGADT7系統(tǒng)

14-16周

膜蛋白體系酵母雙雜交文庫篩選技術(shù)服務(wù)

基于分離的泛素介導(dǎo)的膜蛋白酵母雙雜交系統(tǒng)

14-16周

 

服務(wù)一、酵母單雜交文庫構(gòu)建服務(wù)

  酵母單雜交體系能在一個簡單實驗過程中,識別與DNA特異結(jié)合的蛋白質(zhì),同時可直接從基因文庫中找到編碼蛋白的DNA序列,而無需分離純化蛋白,實驗簡單易行。為了獲得良好的酵母單雜交篩選實驗結(jié)果,構(gòu)建酵母單雜的文庫至關(guān)重要,我們可以依據(jù)不同的實驗需要及物種特性,選擇不同的體系建庫方法,我們的技術(shù)專家可以熟練的應(yīng)用Clonetech的SAMRT方法和life的gateway方法建立,同時,我們的技術(shù)專家也開發(fā)出了基于同源重組原理的建庫方法。

 

★ 酵母單雜交文庫構(gòu)建實驗流程: 
 1. RNA提取 
 2. mRNA提取 
 3. cDNA的酶促法合成
 4. cDNA連接接頭 
 5. cDNA按長度分離 
 6. cDNA與酵母單雜交文庫載體pGADT7進行all-direct重組 
 7. 重組產(chǎn)物電轉(zhuǎn)化 
 8. 文庫檢測以及質(zhì)粒提取

 

★ 酵母單雜交文庫構(gòu)建實驗材料要求: 

客戶構(gòu)建的酵母單雜交cDNA文庫,由客戶提供組織、細胞或總RNA給我們即可:

細胞樣本:細胞數(shù)量大于1*10^7;

動物樣本:大于1g;

植物樣本:大于2g;

總RNA:大于200ug。

熱線電話:010-56256916

關(guān)注公眾號

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